畜牧兽医学报 ›› 2016, Vol. 47 ›› Issue (5): 970-977.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.05.014
提金凤1,2,李志杰2,李秀丽1,张敏敏1,张媛媛1,刁有祥1*
TI Jin-feng1,2,LI Zhi-jie2,LI Xiu-li1,ZHANG Min-min1,ZHANG Yuan-yuan1,DIAO You-xiang1*
摘要:
为了建立坦布苏病毒(TMUV)感染鸭群的抗体检测方法,以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,并对该方法进行了检测条件的优化。将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+),利用BL21(DE3)表达NS1蛋白,纯化后其质量浓度为4.16 μg•μL-1。通过方阵试验,确定了NS1蛋白的最佳包被质量浓度是100 ng•孔-1,检测血清的最佳稀释倍数为40倍。随后对检测条件进行了优化,优化后的结果:抗原的最佳包被条件是4 ℃作用过夜;酶标二抗的最佳工作条件是稀释5 000倍,37 ℃作用1 h;阴阳血清的临界值为0.278。一系列试验验证了该检测方法具有很强的特异性、敏感性、重复性。对采集自山东各地的80份血清样品进行检测,其检测结果显示,该方法与经典的鸡胚中和试验检测结果的符合率为93.5%以上,且比传统的中和试验更敏感。对TMUV感染鸭群的血清进行检测,描述了TMUV感染后鸭群抗体水平的消长规律,为该病的防治提供重要的理论依据。以NS1蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立为临床上TMUV的感染提供了一种新的抗体检测方法,尤其是在TMUV早期感染的检测方面有着更为广泛的应用前景。
中图分类号: